测总氮注意事项-老实验员经验总结

    以下是测TN的老实验员和网上同行的经验之谈，南方标准物质网特列出几点注意事项，请大家多多指导，多提意见；希望对新手有所帮助.

一、原理：

溶解的有机物在220nm处也会有吸收，而NO3-在275nm处无吸收。

二、试剂、设备：

1、水：二重蒸馏水，最好当天制。

2、碱性过硫酸钾溶液（4%K2S2O8 1.5%NaOH），按实际用量配。

（1）K2S2O8：纯度要求高，宜用国药分析纯（老批号的纯度也不够）。

4%溶于60%的水中：不易溶解，特别是温度低于15℃时。宜开50℃水浴 间断搅拌助溶，溶后放冷至室温。注意，冬天过冷会析出结晶（20℃时的饱和溶解度为4.7%，10℃时为2.7%），冷到室温马上配，或者实验室开空调。

（2）NaOH：易溶，宜先溶好K2S2O8后，配NaOH并放冷：1.5%溶于20%的水中。

（3）K2S2O8溶液冷却至室温后，缓缓加入冷却到室温的NaOH溶液，搅拌，定容（不用很准，可用量筒或烧杯）。

（4）贮于聚乙烯瓶内，可放一周。一般当天现配现用。

3、（1 9）HCl

4、KNO3标液（用标贮液现配标用液，这才准）

（1）标贮液：1.8045 g经105-110℃烘3h的优级纯KNO3，溶解后定容至500mL，即含NO3-N：500mg/L。0-10℃暗贮，≥6个月。

（2）标用液：取1mL标贮液稀释到50mL，即为10mg/L的NO3-N标用液。

5、玻璃器皿：可用（1 9）HCl浸洗→蒸馏水冲洗，单独存放，防止交叉污染影响空白。对比色管，可先校准10mL、25mL刻度线。

6、压力锅：先加水浸过垫圈。一锅最多煮50根，但放太紧影响吸光度，最好每锅不超过40根。

7、质控样：取标准物质现配（也易失效），或自配。

（1）质控母液（1000mg/L）：1.8045 g经105-110℃烘3h的优级纯KNO3，溶解定容至250mL。

（2）质控样（1mg/L）：先取1mL质控母液，稀释定容至50mL；再从此50mL中取5mL稀释定容至100mL，即得1mg/L的质控样。

三、操作步骤

1、制标线：取0，0.50，1.00，2.00，3.00，5.00mL KNO3标用液于25mL比色管中，用无氨水稀释至10mL标线。宜做2个空白样。也可每次平行测中等浓度标液和空白各2份，校核原有曲线（均值相减后，与以前所制曲线上相同点核对，二者相对差值按方法精度要求<5-10%）。

2、质控：每次移取标准物质或质控样溶液时，倾出而非直接移取，防止污染或带入水分，使标准物质溶液失效。

3、取水样：比色管贴好标签（透明胶带缠紧，防止消解后脱落），依序排好，取10mL水样至刻度线（或用移液管准确移取），或取适量水样（使氮含量为20-80微克，即消解定容后的比色溶液的总氮浓度为0.8-3.2mg/L）。

4、加5mL碱性过硫酸钾溶液，塞好塑料塞，用纱布 皮筋扎紧，防迸溅。单层纱布 单根皮筋，也别过紧（难解下，且易损坏比色管）。可用10mL移液管，边加液边盖塞子。

5、比色管放大烧杯中（同一试管架的放一个烧杯，便于取出后排序。建议一个烧杯里最多放9-10根管子，过挤可能导致吸光度过高。余者可放烧杯外，但勿倾斜），放入压力锅（先检查加水至垫片处）。加热至120-124℃，断电，缓缓放气至指针回零（排出冷空气，一定要缓，否则吸光度可能异常偏高）。再加热，在120-124℃保持30分钟（老实守在旁边按插座开关）。或于家用压力锅中，加热至顶压阀吹气起计时，保持30分钟。

6、断电，自然冷却，缓慢开阀放气，取出比色管并冷至室温（耐心等，否则吸光度有的大有的小。可消解后冷却过夜，次日再取出）。如用民用压力锅，要充分冷却方可开锅盖，防比色管盖蹦出。取下皮筋、纱布，依序排好比色管，依序取下塞子并排好。加入1mL（1 9）HCl，用无氨水稀释至25mL标线（可用洗瓶，边旋管边挤少量水，冲下比色管口一圈的水珠，再用胶头滴管定容）。盖好塞子，混匀。

7、开紫外分光光度计（宜预热15分钟，使读数稳定），以无氨水做参比，用10mm石英比色皿分别在220、275nm处测吸光度。

比色皿须很干净，用前、后以蒸馏水冲洗→酒精棉球擦洗→蒸馏水冲洗。每测10个水样须以酒精再洗一次，防止沾污有机物而使吸光度异常偏高。测中随时关注参比的吸光度，防止中途沾污；随时关注测值，判断异常。

    也有的同志说玻璃器皿的清洁，最好用盐酸（1 9）或硫酸（1 35）浸池，清洗后再用无氨水冲洗数次

        水样含悬浮物时，取消解定容混匀后的溶液，取其澄清后的上清液比色。

       注：A275/A220应小于20%，越小越好，超过时应予鉴别。空白值A220－2A275应小于0.03。

以上如有总结的不到位或是有错漏的地方还请与我们联系批评指正,南方标准物质网的所有成员愿意虚心接受指导,谢谢.
在此感谢老同志pyhlfg的默默奉献.


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